1. 營養(yǎng)成分的保持

濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當(dāng)數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng)，造成培養(yǎng)基中原有營養(yǎng)成分的數(shù)量變化，因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。

2. 微生物的耐熱性

細(xì)菌芽孢的熱阻較大，滅菌所需要的時間取決于把細(xì)菌芽孢減少到所規(guī)定數(shù)目的時間。

3. pH值

pH值對微生物的耐熱性影響很大。pH值介于6.0~8.0時，微生物最不易死亡。pH<6.0時，微生物比較容易死亡，此時H+很容易滲入微生物的細(xì)胞，從而改變細(xì)胞的生理反應(yīng)，促使其死亡。所以培養(yǎng)基的pH越低，所需的時間也越短。

4. 培養(yǎng)基成分

油脂、糖類及蛋白質(zhì)等組成的高濃度有機(jī)物會包于細(xì)胞的周圍形式一層薄膜、影響熱的傳導(dǎo)。而高濃度的鹽類、色素則削弱其耐熱性，滅菌較易。例如：大腸桿菌在水中加熱至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加熱4-6分鐘才死亡，在30%糖液中需30分鐘才死亡。一般糖類含量較多的時候最好選用115℃，30分鐘；一般的培養(yǎng)基可選擇121℃20分鐘。

5. 泡沫

泡沫中的空氣形成隔熱層，使熱量難以滲透進(jìn)去，殺死其中的雜菌。

6. 顆粒

顆粒小，容易滅菌，顆粒大，則難滅菌。對于含有少量較大顆粒及粗纖維的培養(yǎng)基，可用粗濾的方法（不應(yīng)影響培養(yǎng)基質(zhì)量）予以除去，培養(yǎng)基結(jié)塊會造成培養(yǎng)基滅菌的不徹底。