一、項目名稱：

血漿凝血酶原時間測定（prothrombin time ，PT）

二、檢驗方法名稱：

凝結(jié)法

三、方法學(xué)原理：

在確定量的血漿樣本經(jīng)過一定時間的加溫后，加入試劑。加入試劑后，采用波長為660nm的光照射樣本。凝血過程（纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白）中血的渾濁度可以通過測量散射光光強度的改變來測定。從散射光光強度的測定，可以做出凝血曲線，通過Percentage Detection Method法求得凝血時間。

四、方法學(xué)溯源：

凝血酶原時間（PT）測定是Quick于1935年創(chuàng)立的。在受檢血漿中加入過量的組織凝血活酶（人腦、兔腦、胎盤及肺組織等制品的浸出液）和鈣離子，使凝血酶原變?yōu)槟�，后者使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。觀察血漿凝固所需要的時間即凝血酶原時間。其凝固時間取決于凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅰ的水平。該試驗是反映外源凝血系統(tǒng)最常用的篩選試驗。

五、儀器：

（一）型號：Sysmex CA—1500自動血液凝血分析儀

（二）分析和計算參數(shù)：

1．處理量：約120個測試/小時

2．所需樣本量：50μl 

3．檢驗時間：在最長檢驗時間之內(nèi)測出結(jié)果，典型最長檢驗時間：100秒

4．重復(fù)性：CV≤2%

5．計算參數(shù)：凝血酶原活動度（PT%）

凝血酶原比值（PT R）

國際標(biāo)準化比值（INR）

六、試劑及配套品：

（一）試劑：

1. 凝血活酶含鈣試劑（Thromborel® S）

（1）商標(biāo)：德靈（DADE BEHRING）

（2）包裝規(guī)格：Pack for 10×4ml

（3）代碼：No.OUHP 29 , or

（4）參數(shù)：ISI（國際敏感度指數(shù)）=0.97

（5）成分：

1）Thromborel® S Reagent :

a. 凍干人胎盤促凝血酶原激酶（lyophilized human placental thromboplastin）

b. 氯化鈣 (calcium chloride)

c. 穩(wěn)定劑 (stabilizers)

2) 防腐劑（Preservatives）:

a.慶大霉素（Gentamicin）(0.1g/L)

b. 5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮和2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（5-chloro-2-methyl-4-isothiazol-3-one and 2-methyl-4-isothiazol-3-one）（最大量 20mg/L）

2．佛羅那巴比妥緩沖液（Dade® Owren'S Veronal Buffer）

（1）商標(biāo)：德靈（DADE BEHRING）

（2）包裝規(guī)格：Pack for 10×10ml

（3）代碼：B4234-25

（4）成分：

1）2.84×10­²M的巴比妥鈉 (sodium barbital)

2）1.25×10­¹M的氯化鈉 (sodium chloride)

3) PH 7.35±0.1

3. 清洗液（Cleaning） 

2%次氯酸鈉溶液（自配）

（二）配套品：

1.標(biāo)準血漿（Standard Human Plasma）

(1) 商標(biāo)：德靈（DADE BEHRING）

(2) 代碼：No. ORKL

2.校準質(zhì)控血漿（Ci-Trol®）

(1) 商標(biāo)：德靈（DADE BEHRING）

(2) 代碼：Level 1, B4244-10

Level 2, B4244-20

Level 3, B4244-30

3.質(zhì)控血漿（Control Plasma）

(1) 商標(biāo)：太平洋（Pacific Hemostasis）

(2) 代碼及規(guī)格：Level 1 (Normal), 100595 10×1ml

Level 2 (Abnormal), 100596 10×1ml

Level 3 (Abnormal), 100597 10×1ml

七、操作步驟：

（一） 開機：開機前，先打開連機的打印機。按下機器右邊的POWER按鈕。開機后機器進行自檢，當(dāng)屏幕上邊顯示“Ready”時可以進行試驗。

（二）洗針：在主屏幕上選“Rinse Probe”，然后按下“Execute”進行洗針。

（三）準備試劑：按照儀器試劑位置程序要求，把每一項的試劑準備好，放在相應(yīng)的位置。（注：PT試劑的配制：在凍干粉試劑瓶中加入蒸餾水4ml，于37ºC溫箱或水浴箱中放置30min）。

（四）準備標(biāo)本：將室內(nèi)質(zhì)控和離心好的樣本放在相應(yīng)的樣本架上（一個架子可放10個樣本），準備好放在進樣器上。

（五）準備反應(yīng)杯：打開儀器上蓋裝反應(yīng)杯的蓋子，查看反應(yīng)杯是否夠量，需及時添加。

（六）輸入試驗項目：按下主菜單上的“Work List”鍵，在試驗項目鍵點擊PT，使PT鍵由“—”變?yōu)?ldquo;O”。如有需要按屏幕下的“Repeat”鍵，儀器會自動重復(fù)十個樣本的檢測項目與第一個樣本相同。屏幕右邊的光標(biāo)移動鍵，按下“NEXT”表示翻到下一個界面，按“↑”表示向上移動光標(biāo)，“←或→”表示下一個界面試驗項目。

（七）輸入樣本號：按下“ID No.Entry”，按順序輸入樣本的序號或病人的病歷號。

（八）開始檢測：待一切準備工作就緒，按下儀器右上角“START”鍵，儀器開始工作。

（九）查看結(jié)果：返回主屏幕，檢測的項目如果由“◎”變?yōu)?ldquo;●”表明此試驗已經(jīng)完成，然后按下“Stored Date”（儲存結(jié)果）鍵，屏幕會換到結(jié)果顯示界面，檢測的結(jié)果會自動傳輸?shù)酱水嬅�，如果查看反�?yīng)趨勢圖，按下邊第一個菜單“Graph”，查看凝集趨勢、吸光度、結(jié)果等。

（十）洗針：當(dāng)做完一批標(biāo)本以后，需要洗針，按下“Rinse Probe”，然后按下“Execute”進行洗針。

（十一）關(guān)機：回到主屏幕下，在洗完針以后方可關(guān)機，切斷電源，關(guān)閉打印機。

八、 參考范圍：PT（sec）：11—14 s

PT% ：80%—120%

PT R ：1±0.15

INR ：0.8—1.5

九、 臨床意義：

（一）PT延長 

1．外源凝血系統(tǒng)的因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ和纖維蛋白原減低，如先天性某因子缺乏癥和低（無）纖維蛋白原血癥，但均很少見，獲得性的見于DIC、原發(fā)性纖溶、維生素K缺乏癥、肝臟疾病等。

2．血循環(huán)中抗凝物質(zhì)增加，如肝素或FDP增多等。

（二）PT縮短 口服避孕藥、高凝狀態(tài)和血栓性疾病等。

（三）用于香豆素類等口服抗凝劑的監(jiān)控

1．一般認為以維持PT值在參考值的2倍左右（1.3—2.5倍）即25—30s，或PT R為1.3—1.5（最大不超過2）為宜。

2．PT%應(yīng)控制在40%以上，減低到40%有出血傾向。

3．不同情況下口服抗凝藥治療的最佳抗凝強度時INR的范圍：

（1）術(shù)前兩周或術(shù)中口服抗凝藥，INR為1.5—3.0；

（2）原發(fā)或繼發(fā)靜脈血栓的預(yù)防，INR為2—3；

（3）活動性靜脈血栓、肺梗塞、復(fù)發(fā)性靜脈血栓的預(yù)防，INR為2—4；

（4）動脈血栓栓塞的預(yù)防，心臟換瓣術(shù)后，INR為3—4.5。

十、病人準備和標(biāo)本要求：

（一）采血時，首先應(yīng)該確認病人姓名，并且將姓名和編號寫在真空采血管的標(biāo)簽處。

（二）盡可能保證每次采血都在同樣的條件下進行，即病人處于休息狀態(tài)，并且在早餐前采血。

（三）凝血實驗標(biāo)本最好不與其它實驗一起采集，否則由于標(biāo)本的分配、分裝等而使血液停留在針管的時間延長。

（二）取血時，病人應(yīng)松弛，環(huán)境溫暖，防止靜脈痙攣，止血帶的壓力應(yīng)盡可能小，取血速度平穩(wěn)順利，防止產(chǎn)生氣泡。，。

（三）用定量為3毫升的一次性枸櫞酸鈉（0.11mol/L）真空采血管采血至指定刻度，取血完畢立即輕輕顛倒混均混合均勻，不要劇烈震蕩，并避免產(chǎn)生氣泡。

（四）及時離心，3000轉(zhuǎn)/分離心標(biāo)本10分鐘，以除去血小板。

（五）務(wù)必于采血后2小時內(nèi)測定完畢,如不能完成試驗，冷凍貯存少量血漿（0.5—1ml）（最好在-70℃，或者當(dāng)貯存時間較短時，可以置于-20℃條件下），在實驗前將血漿于37℃下快速融化。血漿用塑料試管存放，并用塑料吸管移取標(biāo)本。

十一、操作注意事項：

（一） 許多的實驗誤差都來源于技術(shù)的錯誤。在實驗技術(shù)、試劑、溫度及PH值上很小的變化都會導(dǎo)致試驗結(jié)果明顯的變化。孵育時間與溫度是凝血酶原時間測定時應(yīng)嚴格控制的參數(shù)。血漿絕不能在37°C下放置10min。