1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)液將K562細(xì)胞配成1×105/ml濃度。用同樣培養(yǎng)液將PBMC配成1×106/ml濃度。

2．取96孔圓底細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加0.1ml K562細(xì)胞懸液；每孔加適量PBMC使效靶比為1：1～5：1，每種處理3個復(fù)孔；3個對照孔只加效應(yīng)細(xì)胞；8個對照孔只加靶細(xì)胞；4個對照孔只加細(xì)胞培養(yǎng)液。每孔加20μl Alamar Blue；每孔總量為0.2ml。

3．在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。

4．直接在熒光檢測儀上檢測熒光強(qiáng)度，激發(fā)波長530nm，發(fā)射波長590nm。各孔熒光強(qiáng)度值應(yīng)減去培養(yǎng)液對照熒光強(qiáng)度的平均值，各復(fù)孔熒光強(qiáng)度的平均值記為AF。按下式計算特異性殺傷百分比：

特異性殺傷（％）＝100×[AF靶細(xì)胞對照－（AF實驗孔－AF效應(yīng)細(xì)胞對照）]/AF靶細(xì)胞對照