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        環(huán)狀沉淀反應

        放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

        以炭疽環(huán)狀沉淀反應為例,此反應又稱Ascoli氏反應。
        (一)材料與試劑
        1.已知炭疽沉淀血清,購買自生物制品所。
        2.待測炭疽沉淀抗原
        3.試管5mm×50mm、滴管
        4.0.3%石炭酸生理鹽水
        (二)操作方法
        1.待測抗原的提取
        (1)取可疑為炭疽而死的病畜的實質(zhì)臟器1g,放入試管或小三角燒瓶中,加生理鹽水5ml~10ml,煮沸30min~40min,冷卻后用濾紙過濾得清澈的液體,即為待測抗原。
        (2)如病料是皮張,可采用冷浸法。將樣品高壓滅活后,剪成小塊并稱重,加約5倍的0.5%生理鹽水,室溫浸泡18h~24小時,濾紙過濾,即為待檢抗原。
        2.取試管5支(5mm×50mm)置于試管架上,編號。第1、2試管內(nèi)加炭疽沉淀血清,第3、4試管內(nèi)加正常血清,第5管內(nèi)加待檢抗原,分別用毛細滴管加至4mm~5mm。
        3.第1、4、5試管輕輕疊加等量緩沖液,第2、3試管輕輕疊加等量待檢抗原。為防止上下兩界面破壞,可將小試管從試管架取出,微傾斜,沿試管壁加入緩沖液或抗原。
        4.在試管架上靜置數(shù)分鐘,觀察結(jié)果。
        (三)結(jié)果判定
        第2管內(nèi)兩液界面出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀帶,其余管無此種沉淀帶判為陽性。
        (四)注意事項
        1.反應物必須清澈,如不清澈,可離心,取上清液或冷藏后使脂類物質(zhì)上浮,用吸管吸取底層的液體。
        2.必須進行對照觀察,以免出現(xiàn)假陽性。
        3.采用環(huán)狀沉淀反應,用以沉淀素效價滴定時,可將抗原做100×,1 000×,2 000×,4 000×,8 000×等稀釋,分別疊加于抗血清上,以出現(xiàn)環(huán)狀沉淀的最大稀釋倍數(shù),即為該血清的沉淀素效價。

         

         

         
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