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        免疫中和反應(yīng)技術(shù)(Neutralization test technique):固定血清稀

        放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

        病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后,失去對(duì)易感動(dòng)物的致病力,謂之中和試驗(yàn)。本試驗(yàn)主要用于:從待檢血清中檢出抗體,或從病料中檢出病毒,從而診斷病毒性傳染;用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類型;測定抗病毒血清或抗毒素效價(jià);新分離病毒的鑒定和分型,中和試驗(yàn)不僅可在易感的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行,亦可在細(xì)胞培養(yǎng)上或雞胚上進(jìn)行。試驗(yàn)方法主要有簡單定性試驗(yàn)、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。

        本法多將病毒作10倍遞增稀釋,分置2列試管,第一列加正常血清(對(duì)照組),第二列加待檢血清(試驗(yàn)組)。混合后,置37作用1h,將各管混合液分別接種選定的試驗(yàn)動(dòng)物,每一稀釋度用35只動(dòng)物。接種后,逐日觀察,并記錄其死亡數(shù),觀察結(jié)束后,計(jì)算LD50和中和指數(shù),本法適用于大量檢樣的檢測。

        表 固定血清稀釋病毒法術(shù)式

        混合前

        病毒稀釋

        2×10-1

        2×10-2

        2×10-3

        2×10-4

        2×10-5

        2×10-6

        2×10-7

        -

        正常

        血清

        稀釋病毒

        -

        -

        -

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        -

        正常血清

        -

        -

        -

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        對(duì)照組

        稀釋液

        -

        -

        -

        -

        -

        -

        -

        1.0

        待檢血清

        稀釋病毒

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        -

        待檢血清

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        1.0

        中和組

        稀釋液

        -

        -

        -

        -

        -

        -

        -

        1.0

        混合后病

        毒稀釋

        10-1

        10-2

        10-3

        10-4

        10-5

        10-6

        10-7

        -

        表 固定血清稀釋病毒法中和試驗(yàn)(例)

        病毒稀釋

        10-1

        10-2

        10-3

        10-4

        10-5

        10-6

        10-7

        LD502

        中和指數(shù)

        正常血清對(duì)照組

        -

        -

        -

        441

        34

        14

        04

        10-5.5

        103.31.995

        待檢血清中和組

        44

        24

        14

        04

        04

        04

        04

        10-2.2

        注:[1]分母為接種數(shù),分子為死亡數(shù);

        2LD50計(jì)算見實(shí)例。

        中和指數(shù)=中和組LD50/對(duì)照組LD50=10-2.2/10-5.5=103.3

        3.3反對(duì)數(shù)是1.995,故中和指數(shù)103.31.995。也就是說該待檢血清中和病毒的能力為正常血清的1.995倍。本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體,對(duì)病毒而言,通常中和指數(shù)大于50者判為陽性,1049為可疑,小于10為陰性。

         

         

         

         
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