一、基本理論

（一）原理

　　在生物體內，許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等，都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力，根據(jù)生物分子間親和吸附和解離的原理，建立起來的色譜法稱親色譜法。親和色譜中兩個進行專一結合的分子互稱對方為配基。如抗原和抗體，抗原可認為是抗體的配基，反之抗體也可認為是抗原的配基。將一個水溶性配基在不傷害其生物學功能的情況下與水不溶性載體結合稱為配基的固相化。親和色譜法的基本過程是：
1.配基固相化。將與純化對象有專一結合作用的物質，連接在水不溶性載體上，制成親和吸附劑后裝柱（稱親和性）。
2.親和吸附。將含有純化對象的混合物通過親和柱，純化對象吸附在柱上，其他物質流出色譜柱。
3.解吸附。用某種緩沖液或溶液通過親和柱，把吸附在親和柱上的欲純化物質洗脫出來。

（二）應用范圍

親和色譜可用于下列生物體系：
酶：底物、抑制劑、輔酶
抗體：抗原、病毒、細胞
外源凝集素：多糖、糖蛋白、細胞表面受體、
細胞核酸：互補堿基序列、組蛋白、核酸聚合酶 、結合蛋白
激素及維生素：受體、載體蛋白
細胞：細胞表面特異蛋白、外源凝集素
親和色譜的優(yōu)點是操作簡便、效率高、條件溫和，缺點是使用局限性大。

（三）載體的選擇原則
　　
　　 用于親和色譜的理想載體應具有下列特性：⑴不溶性：不溶于水；⑵滲透性：疏松網(wǎng)狀結構，容許大分子自由通過；⑶有一定硬度，最好為均一的珠狀；⑷具有大量可供反應的化學基團，能與大量配基共價連接；⑸非特異性吸附能力極低；⑹能抗微生物和酶的侵蝕；⑺有較好的化學穩(wěn)定性；⑻親水性。選擇配基根據(jù)對純化大分子的特異性的全面認識。
　　選擇也的配基有兩條標準：
第一是蛋白質和配基之間必須有強的親和力，解離常數(shù)在5mM以上不是好配基； 相反親和力太高也是有害的，因為在解離蛋白質──配基復合物時所需的條件就要強烈，這樣可能使蛋白質變性。例如用抗生物素蛋白作配基純化含生物素的羧化酶時，生物素──抗生物素蛋白復合物的解離常數(shù)達10-15M，解離時需要pH1.5，6M鹽酸胍，在這種條件中。羧化酶大多數(shù)已經變性。
選擇配基的第二個標準是，配基必須具有適當?shù)幕瘜W基團，這種基團不參與配基與蛋白質之間特異結合，但可用于活化和載體相連接，同時又不影響配基與蛋白質之間的親和力。

（四）常見載體的特性

瓊脂糖凝膠： 親水性強，理化性質穩(wěn)定 （商品名：Sepharose）
聚丙烯酰胺凝膠： 理化性質穩(wěn)定，耐有機溶劑及去污劑， 抗微生物能力強， 特別適應用配基與提取物親和力比較弱的物質。
葡聚糖凝膠： 有良好的化學及物理性質，孔經小。
纖維素： 非特易吸附嚴重，廉價，易得。

二、實驗方法

　　親和色譜分離的方法隨每種分離物質的不同而有不同。一般推薦使用的程序如下：

1選 擇 配 基；2選擇偶聯(lián)凝膠；3偶 聯(lián) 配 基；4裝填合適的柱；5平衡（2-3倍體積緩沖液）；6應 用 樣 品；7洗滌未結合物質；8洗脫結合物質→除鹽；9再生