原理

混合型玫瑰花環(huán)的方法是既應(yīng)用補(bǔ)體致敏的家鴿紅細(xì)胞（PRBC）作為B—細(xì)胞的標(biāo)志，同時(shí)又應(yīng)用綿羊紅細(xì)胞（SRBC）作為T(mén)—細(xì)胞的標(biāo)志，在一張玻片上同時(shí)檢測(cè)T、B淋巴細(xì)胞。

操作方法

1．鴿翼下靜脈采血，加等量阿氏液，保存于4℃，可用2周。

2．以Hank’s液洗鴿紅細(xì)胞3次，最后配成5％PRBC懸液。

3．取5％PRBC0.25ml，加溶血素（兔抗鴿紅細(xì)胞抗體，亞凝集單位）0.25ml于37℃水浴30min。以Hank’s液洗滌3次，去上清，加Hank’s液0.25ml。

4．加1％SRBC懸液0.25ml，37℃水浴30min，Hank’s液洗滌3次，去上清，加Hank’s液0.25ml。

5．加淋巴細(xì)胞懸液0.25ml（2×106～4×106個(gè)細(xì)胞／ml），37℃水浴5min，500r/min離心3min，置4℃過(guò)夜。

6．取出迅速加入20％甲醛溶液0.5ml，混勻，于4℃放置10min后，加2滴2％美蘭液，輕輕搖勻。

7．取1滴于載玻片，加蓋玻片，置鏡下觀察。計(jì)數(shù)300個(gè)淋巴細(xì)胞。

結(jié)果判定

一個(gè)淋巴細(xì)胞吸附有3個(gè)以上的PRBC為PRBC玫瑰花細(xì)胞，即為B細(xì)胞。

一個(gè)淋巴細(xì)胞周圍吸附有3個(gè)以上SRBC為SRBC玫瑰花細(xì)胞，即為T(mén)細(xì)胞。

一個(gè)淋巴細(xì)胞周圍附有2個(gè)以上PRBC和3個(gè)以上SRBC為雙相玫瑰花細(xì)胞，即為D淋巴細(xì)胞。

既無(wú)PRBC又無(wú)SRBC附著的淋巴細(xì)胞為N淋巴細(xì)胞，即為無(wú)標(biāo)記淋巴細(xì)胞。

D淋巴細(xì)胞與N淋巴細(xì)胞是極少數(shù)的。

計(jì)數(shù)300個(gè)淋巴細(xì)胞，分別計(jì)數(shù)PRBC、SRBC玫瑰花細(xì)胞和雙相玫瑰花細(xì)胞的形成率。