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        siRNA制備方法比較

        放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06

        比較項目

        化學合成

        體外轉錄

        RNase III降解dsRNA

        siRNA
        表達載體

        PCR
        表達框

        材料需求

        21-mer RNA
        oligos(
        一對)

        29-mer DNA oligos(一對)

        轉錄模版 (200-1000bp,兩側帶T7 啟動子)

        55-60-mer DNA oligos(一對)

        ~50-mer DNA oligos(一對)

        全部制備/合成時間所需時間

        4—2

        24 小時 DNA oligo合成時間

        1 轉錄模版制備時間

        5天以上 DNA oligo合成時間

        ~ 6 小時 DNA oligo合成時間

        個人所需操作時間

        幾乎不需要*

        中等

        中等

        中等

        是否需要驗證和尋找最有效siRNA

        需要

        需要

        不需要

        需要

        需要

        能否標記siRNA (例如用于熒光顯微鏡分析siRNA進入細胞過程或者在細胞中的定位)

        不能

        不能

        轉染的相對難易程度

        可篩選性 (例如抗生素篩選)

        不可以

        不可以

        不可以

        可以

        不可以

        能否用于長效抑制

        不可以

        不可以

        不可以

        可以(抗生素篩選)

        不可以

        能否大規(guī)模制備

        可以

        有限

        有限

        可以

        有限

        檢測總體轉染效率

        不可以

        不可以

        不可以

        可以

        不可以

        每個基因的相對費用(不包含人力)

        中等

        中等

        中等

        *取決于合成后是否包含純化、去保護,以及廠家提供的是已經退火的即用型雙鏈還是凍干的單鏈

         

         

         
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