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        細胞化學技術(shù)

        放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06

        組織化學或細胞化學染色(histochemical or cytochemical staining)是利用染色劑可同細胞的某種成分發(fā)生反應而著色的原理,對某種成分進行定性或定位研究的技術(shù)。利用這種方法對細胞的各種成分幾乎都能顯示,包括有無機物、醛、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸、酶等。

        (一)、固定

        目的是將細胞的結(jié)構(gòu)和化學物質(zhì)雙重地保存下來,固定細胞的方法有:

        1.物理固定:如血膜空氣快速干燥、冷凍干燥或直接冷凍切片。

        2.化學固定:如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和鋨酸等試劑均能對細胞結(jié)構(gòu)和其中的某些化學物質(zhì)加以固定保存。不同化學試劑所保存的化學成分、對酶活性的影響、保存結(jié)構(gòu)的細膩度均不相同。因此,要根據(jù)實驗要求和組化反應,選擇最佳的固定方法和固定劑。如顯示多糖常用乙醇固定,而顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定。

        (二)、顯示方法

        1.金屬沉淀法:利用金屬化合物在反應過程中生成有色沉淀,借以辨認所檢查的物質(zhì)或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后,反應產(chǎn)物最終生成CoS或PbS有色沉淀,而顯示出酶活性。

        2.偶氮偶聯(lián)法:酚類化合物與偶氮染料結(jié)合后可以形成耐曬染料。

        3.Schiff反應:細胞中的醛基可使Schiff試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色。這種反應通常用于顯示糖和脫氧核糖核酸(Feulgen反應)。

        4.聯(lián)苯胺反應:過氧化物酶分解H202。產(chǎn)生新生氧,后者再將無色的聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍,進而變成棕色化合物。

        5.普魯士藍反應:三價鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用,形成普魯士藍。

        6.Formazane反應:顯示脫氫酶。

        7.“Nadi”反應:顯示細胞色素氧化酶。

        8.脂溶染色法:借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。

        9.茚三酮反應:顯示蛋白質(zhì)。

         

         

         
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